本文主要研究了卡式水分测定法测定三磷酸腺苷二钠的水分含量，采用了两种试剂，一是国产卡式试剂以ψ(乙二醇∶甲醇)=60∶40为溶剂滴定，二是采用进口(双溶液)卡氏试剂滴定。两种试剂测定的回收率分别为96.0%,RSD=4.9%(n=10);99.0%,RSD=315%(n=11),样品测得结果相符。由此得出，国产与进口的卡氏试剂均可用于三磷酸腺苷二钠的水分含量测定，适用于药品的质量控制。 三磷酸腺苷(ATP)是存在生物体内的高能量化合物,直接参与能量代谢,作为辅酶有改善机体代谢的作用[1]。药用ATP为二钠盐,带三个结晶水[2]。三磷酸腺苷二钠质量标准各国药典均无收载。仅日本药局方外医药品规格(1997)[3]卫生部药品标准(1998)[4]收载。其水分测定日本采用卡氏水分剩余滴定法,部颁标准采用五氧化二磷减压干燥法。本文参照日本药局方外法,建立三磷酸腺苷二钠的费休氏滴定法,方法简便、准确,适合于日常检验控制产品质量。
1仪器与试药 瑞士万通(Metrohm)785滴定仪配703型卡氏水分滴定台,日本岛津(ShimadzuLibrorAEU2130)电子天平。卡氏试剂(天津四友KFR206无比吡啶卡尔费休试剂)、无水甲醇、乙二醇。德国产(Sigma2Aldrich)卡氏试剂(HydranalSolven、Hydranal2Titrant5)均为市售。
三磷酸腺苷二钠原料:日本协和发酵株式会社进口(批号:K930529、K320470、K330501);意大利Pro.Bio.Sint厂生产(批号:03/01901、03/02001、03/02101);江门甘蔗化工(集团)股份有限公司提供(批号:20030303、200304011);上海太平洋高科技有限公司提供(批号:200306041、200307053)。
2实验方法与结果
2.1方法(一)
2.1.1卡氏试剂(天津四友)的标定取ψ(乙二醇∶甲醇)=60∶40混合溶液40mL置滴定杯中,开启滴定仪自动用卡氏试剂消除溶剂中的水分,达平衡后,精密称取蒸馏水20mg加入滴定杯中,用卡氏试剂滴定至终点。重复数次,以水重与消耗的卡氏试剂mL数计算滴定度为3.1994(RSD=1.0%,n=3)。
2.1.2回收率的测定取ψ(乙二醇∶甲醇)=60∶40混合溶液40mL,置滴定杯中,滴定仪自动用卡氏试剂消除溶剂中的水分,达平衡后,精密称取意大利Pro.Bio.Sint厂生产批号为03/02001的样品约100mg,充分溶解后,用卡氏试剂滴定至终点,计算含水量为8.05%、7.45%、8.18%,平均=7.89%(RSD=4.9%,n=3)。同法,取ψ(乙二醇∶甲醇)=60∶40混合溶液40mL,精密称取该样品适量和蒸馏水10mg充分溶解后,用卡氏试剂滴定至终点,计算回收率,结果见表1。
2.1.3样品的测定取ψ(乙二醇∶甲醇)=60∶40混合溶液40mL,精密称取样品约100mg依法测定。
2.2方法(二)
2.2.1卡氏试剂的标定取HydranalSolvent溶剂40mL置滴定杯中,开启滴定仪用Hydranal2Titrant5卡氏试剂自动消除溶剂中的水分,达平衡后,精密称蒸馏水20mg加入滴定杯中,用卡氏试剂滴定至终点。重复数次,以水重与消耗的卡氏试剂mL数计算滴定度为4.6556(RSD=0.4%n=4)。
2.2.2回收率的测定取HydranalSolvent溶剂40mL,置滴定杯中,滴定仪自动用卡氏试剂消除溶剂中的水分,达平衡后,精密称取意大利Pro.Bio.Sint厂生产批号为03/02001的样品约100mg,充分溶解后,用卡氏试剂滴定至终点,计算含水量为7.35%、7.03%、7.92%,平均=7.43%(RSD=6.1%n=3)。同法,取HydranalSolvent溶剂40mL,精密称取该样品适量和蒸馏水10mg充分溶解后,用卡氏试剂滴定至终点,计算回收率。
3讨论 3.1方法的选择三磷酸腺苷二钠结构上含有3个结晶水,理论含水量为8.9%,该品有吸湿性。部颁标准采用五氧化二磷减压干燥法测定,不易将全部水分蒸发除掉,只能测出约7%含水量。日本采用卡氏水分剩余滴定法:将样品放入溶剂中,准确加入一定量的卡氏试剂充分溶解、反应后,用标准水溶液滴定剩余的卡氏试剂。该法优点在于能保证卡氏试剂与样品所含水充分反应,但方法繁琐,耗时。中国药典二部2000年卡氏水分测定法中没有收载剩余滴定法。
3.2卡氏试剂的影响KarlFischer[5]于1935年报道测定水含量的新方法至今,该方法得到了广泛的应用,卡氏试剂也在不断改良。商品化卡氏试剂有单一溶液和双溶液[6]。天津四友生产的无吡啶卡氏试剂为单溶液,含碘、二氧化硫、有机碱与甲醇,为中国药典2000年版二部附录收载方法。三磷酸腺苷二钠在甲醇中溶解度低,参照日本药局方外医药品规格(1997)三磷酸腺苷二钠水分测定方法,加乙二醇作为助溶剂,乙二醇2甲醇体积比为60∶40。德国(Sigma2Aldrich)产卡氏试剂为双溶液:HydranalSolvent为溶剂,Hydranal2Titrant5为滴定剂。HydranalSolvent溶剂由咪唑、二氧化硫与甲醇组成,Hydranal2Titrant5滴定剂由碘与甲醇组成。由于含有机碱咪唑三磷酸腺苷二钠在HydranalSolvent溶剂中可溶解,直接测定。
(来源：中国化工仪器网)
.jpg){kind=small}